MauriceFlex? 是最新一代 Maurice? 家族產品，具備 icIEF 組分收集功能，能夠實現 icIEF 模式多種樣品的分離和制備回收。組分收集功能需使用 MauriceFlex? 卡盒進行等電聚焦，用以分離蛋白質電荷變異體。一旦聚焦和分離后，電荷變異體通過化學遷移方式，進而用于組分收集。
與離子交換色譜 (IEX) 相比，MauriceFlex? 組分收集更快速，可提供更高分辨率以及基于 pI 等電點的譜圖，克服了在線直連 cIEF-MS 的一些局限性，例如需要配備專用接口以及背景電解質與質譜不兼容等問題。此外，離線組分收集以及從多個組分中匯集電荷變異體為質譜表征提供了更多的靈活性，靈活實現完整分子量、還原后分子量和肽圖分析。
MauriceFlex? 支持常規 icIEF 和 CE-SDS 分析。所有數據通過 iCE 軟件處理 (21CFR Part 11兼容)。icIEF 和 CE-SDS 雙模式符合2020版中國藥典。
01. 實驗亮點
通過使用 MauriceFlex? 對 NIST mAb (RM 8761) 進行 icIEF 組分收集以及質譜鑒定實驗，已證實：
? 高純度的電荷變異體可以在一天內獲得。
? 單次組分收集可以提供足夠的電荷變異體用于完整分子量分析。
? 通過多次匯集電荷變異體，用戶可進行 LC-MS 肽圖分析。
02. 組分收集流程
（1）設置 (~30min)
- 加入試劑和 NIST mAb (1mg/mL)
- 插入 MauriceFlex? 卡盒
（2）聚焦 (45min)
- 電壓
- 10min@500V
- 10min@1000V
- 25min@1500V
（3）遷移 (25min)
- 遷移試劑 5mM NH4Ac
- 電壓1000V
（4）收集 (20min)
- 組分收集：36 個組分通過 25s/組分的頻率在 96 孔板收集，每個孔包含 30μL 5mM NH4Ac
- 電壓：1000 V
（5）確認（4~5hours）
- 通過分析型 Maurice? icIEF 確認組分和純度
- 16個組分得到確證
03. 實驗結果
圖1 NIST mAb分析型 (A) 和組分收集型icIEF圖譜 (B)
MauriceFlex?組分收集方法可以基于Maurice? icIEF 分析方法快速建立。使用 Maurice? 分析型和 MauriceFlex? 組分收集型卡盒對 NIST mAb 進行 icIEF 分離。我們鑒定了 NIST mAb 的 5 個電荷變異體 (B2、B1、M、A1、A2)，并獲得了它們的相對豐度 (圖1A)。兩種圖譜顯示電荷變異體數量相同。每個變異體的相對豐度 (%) 是根據分析型圖譜 (A) 中的峰面積計算的。
圖2 Maurice? icIEF分析型實驗對組分的電荷變異體進行鑒定和純度驗證
圖2顯示了含有最高純度單個電荷變異體的icIEF電泳圖，組分#10中除了低豐度 (0.9%) B2的純度為65%外，我們獲得了4個電荷變異體純度為100%的組分。
圖3 LC-MS提供電荷變異體完整分子量分析 - 總離子流圖 (上)、質譜圖 (中) 和去卷積譜圖 (下)
表1 完整分子量分析修飾匯總表
高純度電荷變異體組分 LC-MS 完整分子量分析如圖3所示，從去卷積質譜中鑒定出的每種電荷變異體的修飾如表1所示。鑒定結果與 NIST mAb 電荷變異體已知的修飾情況一致。
圖4 B1和 A1組分的肽圖分析
表2 所有電荷變異體組分的輕鏈 (LC) 和重鏈 (HC) 序列覆蓋
圖4 和表2 展示了匯集 10 次后樣本的肽圖分析結果。結果表明，除了低豐度 B2 (相對豐度0.9%) 和 A2 的重鏈 (HC) 外，其余電荷變異體的序列覆蓋率均在 90% 以上。MauriceFlex?
MauriceFlex?
全自動毛細管電泳分析與組分收集系統
? 一機智能：CE-SDS、Turbo CE-SDS、icIEF和icIEF組分收集
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