諾坦普 (NanoTemper)
新一代 Monolith 系列分子互作分析儀
MO 系列分子互作儀,采用創新性的光譜位移技術 (Spectral Shift) 和 經典的微量熱泳動技術 (MicroScale Thermophoresis, MST),輕松檢測具有挑戰性的分子互作。僅需極微量的樣品 , 即可在液體環境中快速、精確地定量檢測各種類型的分子間相互作用力,且檢測濃度范圍廣、操作簡單。
1. 技術優勢
功能全面,靈活應對不同類型的親和力檢測項目
(1)實現幾乎所有類型分子間的親和力檢測:從IDPs、膜蛋白、大型蛋白復合體到PROTACs、小分子甚至離子,檢測各種類型的分子間結合。
(2)不依賴于分子量和粒徑變化檢測:結合檢測不受由配體結合引起的粒徑和分子量變化限制。
(3)樣品消耗量極低:為 ITC 實驗準備大量的、高濃度的互作樣品是非常困難的。Monolith 系列僅需幾微升的樣品濃度即可,為您節約寶貴的樣品。
(4)液體環境檢測,更接近天然條件:在液體環境中直接檢測,且適用于幾乎所有的緩沖液,保證樣品在天然條件下自由發生相互作用,獲得更可靠的結果。
(5)不僅限于取得Kd值數據:研究人員還可計算結合的化學計量比*和熱力學參數*,并通過競爭結合實驗進行相對親和力
和協同性評估*。
* 需進行線下數據處理及分析,無法在MO系列儀器配套軟件中完成。
(6)不局限于兩種分子間的互作分析:競爭結合實驗、多種分子結合檢測都可以輕松搞定。
高品質的毛細管則保證了高品質的數據,使用毛細管的優勢眾多:僅需微量樣品,在溶液中檢測,
接近天然環境,無需固定樣品,甚至無需進行蛋白純化。
2. 技術原理
Monolith 可搭載光譜位移和 MST 兩種生物物理檢測方法,用于結合親和力的檢測。
在實驗中,我們對其中一個分子進行熒光標記*,然后將其與一系列梯度稀釋的結合分子等量混勻,接下來使用毛細管吸取樣品并放入儀器開始檢測。
*此外,色氨酸內源熒光也可用于免標記 MST 檢測。
(1)光譜位移技術(Spectral Shift )
光譜位移技術通過熒光發射光譜的藍移或紅移來檢測分子間的結合。Monolith X 在等溫條件下精確檢測
650nm 和 670nm 雙波長的發射光,因而能夠精確檢測到極細微的光譜位移。接下來,以配體濃度為橫坐標,雙波長熒光強度的比值為縱坐標作圖,擬合得到平衡解離常數 Kd。

(2)微量熱泳動技術(MicroScale Thermophoresis)
微量熱泳動(MicroScale Thermophoresis,MST) 是一種定量分析生物分子間相互作用的前沿技術。通過精確檢測熒光變化,結合靈敏的熱泳動現象,MST 提供了一種靈活、強大和快速測量分子間相互作用的
方法。MST 技術是通過激光在溶液中產生精確而短暫的溫度變化從而檢測配體結合引起的熒光強度變化。以配體濃度為橫坐標,熒光值為縱坐標作圖,從而獲得平衡解離常數 Kd。

MO 系列儀器測量一個 Kd 值僅需 10 分鐘,專家模式下最快僅需 90 秒,而無需額外冗長的數據分析。通過檢測與配體結合后,熒光標記的蛋白或者具有自發熒光的樣品的熒光強度在溫度梯度中隨時間而變化 (上左圖中灰色部分),然后將選定時間段內的熒光強度對應配體濃度進行擬合作圖,軟件自動計算得到該結合的親和常數 Kd 值 (上右圖)。
3. 儀器軟件
智能軟件自動進行數據分析,使您對實驗結果更加自信。
對于大多數的軟件,當您加載樣品之后才會啟動。但是 MO 軟件別具一格——它不但可以在實驗啟動之前
為您提供每一步驟的詳細指導,助您快速設置實驗;而且實驗結束時,會立即根據所得數據提供實驗優化
建議,全程為您提供可靠信息。MO. Control 2 軟件增加而了緩沖液條件優化功能,提高效率,幫助您快速獲得結果。
4. 應用范圍
Monolith 系列分子互作儀可以檢測幾乎所有類型的分子互作,包括蛋白,小分子,多肽,核酸,
脂類等,應用范圍非常廣泛。
(1)蛋白——小分子
? 自噬—溶酶體靶向降解
? 基于結構的藥物設計
? “靶向降解組學”鑒定中藥成分靶點
? 中藥小分子抑制劑作用機制
? 靶向雄激素受體液 - 液相分離的藥物開發
? 新型泛素化反應的分子機制
(2)蛋白——離子
? 植物硝態氮新受體
? 植物免疫抑制與廣譜抗病機理
? 銅元素調節水稻廣譜抗病毒的機制
? 低溫特異鈣信號的感知和應答機制
(3)蛋白——多肽
? 植物防止多精受精的分子機制
? 小肽—受體激酶調控花粉與柱頭識別的分子機理
? 植物重要肽激素作用機理
? 多肽 PROTAC 降解致癌蛋白
(4)蛋白——蛋白
? 淬滅抑制蛋白 SOQ1 調節 qH 的作用機制
? 胃癌基因治療新靶點 CPEB3 作用機制研究
? 精子與卵子受精識別的結構基礎
? 抗原表位研究
(5)蛋白——核酸
? CRISPR-Cpf1 識別剪切 RNA 的分子機制
? 核酸適配體檢測霉菌毒素
(6)蛋白——脂類
? 新冠病毒 S 蛋白結合膽固醇
? 調控蛋白與磷脂酰肌醇二磷酸識別機制
(7)蛋白——復合物
? 蛋白酶體與去泛素化酶動態調控機制
(8)蛋白——納米顆粒
? 靶向乳酸代謝的工程仿生納米顆粒治療膠質瘤
? 多肽修飾的納米顆粒抑制病毒侵染
? 核酸適配體修飾的納米顆粒探針
(9)蛋白——糖類
? 流感病毒結構改變介導病毒在人類傳播的機制
(10)免純化 / 無標記檢測
? 老藥新用,Wnt/β-catenin 信號通路活性抑制
? 血清中多克隆抗體 - 海洛因結合檢測
? 葡萄糖轉運蛋白抑制劑